蜂膠乙醇提取物基因抗突變作用的研究

第17卷第1期A(yíng)ntagonistic Effect of Propolis蜂膠乙醇on mutation induced提取物基因by Thiotepa Adriacin抗突變and Acridine Orange作用的研究WANG Ju-xiang, PEI Shi-geng, men Jin-e',et王菊香裘士庚門(mén)金娥3/田珂3Hebei Engineering College鄭海萍冫王延臣3段曉輝Handan 056029, China; 2. Derparment of oto Laryngolog(1.河北工程學(xué)院衛生教研室河北邯鄲the Affiliated Hospital of Hebei Engineering College, Handan 056000056029;2.河北工程學(xué)院附屬醫院耳鼻喉科China; 3. Experimental Center of the Medical Faculty河北邯鄲0560003.河北工程學(xué)Hebei Engineering College, Handan 056000, China)院醫學(xué)部中心實(shí)驗室,河北邯鄲056000【摘要】背景與目的探討蜂膠乙醇提取物對噻替哌等誘變劑誘發(fā)的基因突變旳抑制作用。材料與方法:用Aπes試驗檢測蜂膠乙醇提取物的誘變性及對噻替哌、阿霉素、吖啶橙誘發(fā)的T和?ω菌株回復突變后的抑制作用。結果:在1-1000μg/蜂膠乙醇提取物對'As和'A菌株未岀現回變菌落數的增高。10~250μg/皿蜂膠濃度岀現中等強度或以下強度抑制(抑制率<75%);000μg皿蜂膠濃度岀現高強度回變菌涪數抑制且對試驗所設3種誘變劑誘發(fā)的基因突變的抑制作用均有劑量-效應關(guān)系。結論:蜂膠對噻替哌等誘變劑所誘發(fā)的不同類(lèi)型的基因突變均有不同程度的抑制作用【關(guān)鍵詞】蜂膠;誘變劑;Ames試驗;基因突變中圖分類(lèi)號:R394.6文獻標識碼:A文章編號:1004-616X2005)1-0039-02ABSTRACT] BACKGROUND&AIM: To study the antagonistic effect of propolis on gene-mutation induced by thiotepaand other strong mutagens. MATERIAL AND METHODS: Using Ames-test, the antagonistic effect of propolis to reversemutation of strains TAlco and TA98, which induced by thiotepa, adriacin and acridine orange, were assessed. RESULTS: Thepropolis inhibited all the mutations induced by the three kind of mutagens and showed dose-effect relationship. Dose of10-250 ug/plate of propolis could inhibit mutations by the middle intensity or below (restrain rate 75 %). At dose of1 000 Pg/plate of propolis could strongly inhibit mutations induced by thiotepa, adriacin, and acridine orange. There wereno mutant character of the propolis. CONCLUSION: There were antagonistic effect of propolis to gene-mutation induced bydifferent kinds of mutagen. such as adriacinI KEY WORDS I propolis; mutagen; Ames test; gene mutation蜂膠是蜜蜂從樹(shù)皮的裂縫和植物的幼芽上采集植1材料與方法物的樹(shù)脂,加入唾液中的酶和助消化物質(zhì)以及蜂蠟,經(jīng)1.1蜂膠從邯鄲縣某養蜂廠(chǎng)采集新鮮蜂膠,冰咀嚼調制而成的一種樹(shù)脂狀物質(zhì)。研究表眀蜂膠中含凍粉碎后以95%乙醇浸泡提取ηh,過(guò)濾,濾液于40有多種具有抗菌、抗氧化、抗病毒、調節機體免疫功能及℃減壓揮干二甲基亞砜(DMSO)溶解定容。防癌抗癌功效的生物活性物質(zhì)·21,一些國家作為民間1.2Ames試驗采用平板摻入法。選用TA和用藥有悠久的歷史有文獻報道蜂膠乙醇提取物對環(huán)TA菌株,菌種引自美國Ames試驗室,經(jīng)中國藥品生磷酰胺等基因突變具有抑制作用,本文用Ames試驗檢物制品檢定所鑒定菌種特性符合試驗要求。均設加與不測蜂膠對噻替哌等誘變劑誘發(fā)基因突變的抑制作用。加S4由中國藥品生物制品檢定所提供)兩種情況,TA菌株用H中國煤化工加S時(shí)用阿霉素作誘CNMHG收稿日期:2004-04-12;修訂日期:2004-08-29基金項目:邯鄲市科學(xué)技術(shù)研究與發(fā)展項目(No.04033作者簡(jiǎn)介王菊香(1963-)汝女,河北省邯鄲市人副教授研究方向:衛生檢驗。Tel:0310-31073820039論著(zhù)Vol 17 No. 1變劑,TA加S時(shí)用吖啶橙作誘變劑。蜂膠提取物設42.2蜂膠乙醇提取物抑制誘變試驗當蜂膠濃度個(gè)濃度組,將45℃融化表層培養基、菌液、陽(yáng)性物、各為10μg/皿時(shí)對吖啶橙引起的TA(+S菌株回復突變濃度蜂膠提取物、S混合液在滅菌試管中混勻后平鋪到率和噻替哌引起的TA(-S)菌株回復突變率均無(wú)抑制底層培養基上37℃培養48h記數回變菌落數并觀(guān)察作用;對阿霉素引起的TA(-S)菌株回復突變率表現菌苔生長(cháng)情況毎組設3個(gè)平行樣重復兩次。誘變試驗為弱抑制,對噻替哌引起的TA(+S)菌株回復突率表結果用每皿回變菌落數和MR值(MR=誘發(fā)回變菌落現為中度抑制。當蜂膠濃度為50Pg/皿時(shí)除對噻替哌引數/自發(fā)回變菌落數)表示,MR≥2并有劑量效應關(guān)系起的TA1a(+S)菌株回復突率表現為中度抑制外,對其時(shí)為誘變陽(yáng)性?？拐T變試驗結果用誘變抑制率表示:它陽(yáng)性物引起的菌株的回復突變率均表現為弱抑制。當抑制率=[(陽(yáng)性物誘發(fā)回變菌落數受試物加陽(yáng)性物誘發(fā)回變菌蜂膠濃度為250Hg/皿時(shí),對吖啶橙引起的TA(+S)菌落數)/(陽(yáng)性物誘發(fā)回變菌落數-自發(fā)回變菌落數)]×100%株的回復突變仍表現為弱抑制,對其它陽(yáng)性物引起的菌抑制率<25%為無(wú)抑制,抑制率為25%~50%株的回復突變率均表現為中度抑制。當蜂膠濃度為100(不包括50%)為弱抑制抑制率為50%-75%(g/皿時(shí),4個(gè)試驗組均產(chǎn)生強抑制最高一組(噻替哌引包括75%)為中度抑制邦制率≥75%為強抑制。起的TAm(+S)組)抑制率達到9.78%。直線(xiàn)相關(guān)分析13統計分析采用SAS軟件對測定結果的劑顯示,四個(gè)試驗組均有劑量效應關(guān)系(相關(guān)系數TA量-效應關(guān)系進(jìn)行直線(xiàn)相關(guān)性分析。S9=0.9684,TAw+S=0.9717,rTA10-S=0.9664,rTA1mS=0.9655均為P<0.05)。見(jiàn)表22結果2.1蜂膠乙醇提取物致突變試驗結果蜂膠濃3討論度在10-10g/皿范圍內末引起突變陽(yáng)性反應(MR許多植物分泌的樹(shù)脂類(lèi)物質(zhì)具有很好的抗菌、防<2)同時(shí)也未發(fā)現抑菌現象。見(jiàn)表1。腐、防水、隔熱等作用可以保護葉、花、果實(shí)、幼芽。蜜蜂表1蜂膠對TA和TA1菌株誘發(fā)回變試驗結果(x±s)Table 1 Inducing mutation of propolis on strans TAIon and TAgsTAus-SyTAos +SyTA-SConcentrationRate ofRate ofRate ofNo, ofNo ofmutation(×10-2)(×10-2)01(×10-2)27.8±3Propolis40.3±3,4121.0±205036.8±3.9157.3±23.31.301.0146.3±3.01.5632.8±4.21.18121.0±12130.8±90.82100038.0±5.31.2837,8±4,0200.9±16.91.66111.6±110.69187.6±17.61.55116.9±14.10.73431,0±21.614,511093.5±52.69.041040.3±50.1Acridine orange488.5±38.5I.36表2蜂膠抑制TA1和TA誘發(fā)回變試驗結果(x±s)Table 2 Inhibition of propolis on reverse mutation of strains T'Aleo and TAgsTAgs-S,TAos +soTAI-SRate ofRate ofRate ofMLg platesuppressAdriacinsuppresssuppress27.8±3.1121.0±20.3160.3±13.2Propolis280.9±65,37.4377.9±47.624.03±6624.6592.9±81.350.866.8±27.306.5±51.3655.6±61.944.0587.3±77.8199.8±34.657.6264.6±39.048.658.6±44.255.0386.5±62.274.31000113.9±11,979,0102,0±27,083,9164.8±21.995.59.040.3±50Adriacin431.0±21.6Compared with group of different propolis concentration, P<0. 0H中國煤化工(下轉第44頁(yè))CNMHGCARCINOUVESYS, TERATOC\ESYS MUTALE\EsYy0040論著(zhù)Vol 17 No. 1化的機率。因此鎘本身存在的弱遺傳毒性加上它引起「]DlyH, Hartwig a. Induction and repair inhibition of oxidative的DNA修復系統功能改變可能是鎘致癌機制的一個(gè)重dna damage by nickel( l)and cadmium(II) in mamma要方面。cells [J]. Carcinogenesis, 1997, 18(5):1021-1026參考文獻:Escherichia coli( MutT)and human(MTH1)8-oxo-dGTPases toin vitro inhibition by the carcinogenic metals, nickel( Il), copperI1] Hartmann A, Speit G Effect of arsenic and cadmium(Ⅱ), cobalt(Ⅲ), and cadmium(Ⅱ)[J. Carcinogenesispersistence of mutagen-induced DNA lesions in human cell1997,18(9):1785-1791[JI. Environ Mol Mutagen, 1996, 27:98-104[9] Coleman JE. Zinc proteins: enzymes, storage proteins, transcription121 Hartwig A. Role of DNA repair inhibition in lead- andAnn Rev Biochem. 1992admium-induced genotoxiccity: a reviPerspect,1994,102(3):45-[10] Hartwig A, Asmuss M,Eh13] Fatur T, Lah TT, Filipic M Cadmium inhibitsmetal ions with DNA repair processes and cell cycle controlmethylmethane-sulfonate and N-methyl-N-nitrosourea-induced DNAmolecular mechanisms[JI. Environ Health Perspect, 2002damage in Chinese hamster ovary cells[]. Mutat Res, 2003110(5):797-799529(1-2):109-116[11 Hartwig A. Zine finger proteins as po4]蔡永庭,鄒介智,瞿永華.簡(jiǎn)化人全血細胞DNA非程序合成netal ions: differential effects on structure and functionLJI檢測化學(xué)致癌物研究[J.腫瘤,1988,8(2):77-792001,3(4):625-6345]沈芳蘭,張秀珍,李玨聲,等.?；撬釋π∈罂寡趸虳NA[12 Asmus M, Mullenders lh, Eker A,etα. Differential修復能力的作用[J.營(yíng)養學(xué)報,1996,18(3):258-261ffects of toxic metal compounds on the activities of Fpg and[6] Pruski AM, Dixon DR. Effects of cadmium on nuclear integrityXPA, two zinc finger proteins involved in DNA repair[J]nd DNA repair efficiency in the gill cells of Mytilus edulis LCarcinogenesis,2000,21(11):2097-2104[JJ. Aquat Toxicol, 2002, 57(3): 127-37(上接第40頁(yè))來(lái)誘變中間體,或者抑制癌細胞增殖信號,更重要的是采集樹(shù)脂并調制成蜂膠后,用來(lái)加固巢、填補蜂巢縫隙某些抗癌活性可能是直接阻斷接受體或接受體信號與空間、涂抹巢房,還用蜂膠密封已被蟄死而不能清除蜂晈抗突變機制有待進(jìn)一步深λ研究,以便充分開(kāi)發(fā)這岀巢外的敵害防止其腐爛?？梢?jiàn)蜂膠是一種夭然抗菌種夭然抗誘變物質(zhì)的臨床應用價(jià)值。防腐物質(zhì)。國內外大量研究已經(jīng)從世界各地蜂膠中鑒定出參考文獻:300多種化合物多種微量元素和維生素2對其中的某1盧志強,婁紅祥.植物活性成分與癌癥的化學(xué)預防[J.中草些化合物單項研究證明蜂膠中的多種物質(zhì)具有抗突變藥,2002,33(6):563-565抗癌作用,5-,根據蜂膠具有的多種生物活性組分的[2郭伽,周立東.蜂膠的化學(xué)成分研究進(jìn)展J.中國養蜂特點(diǎn),本文用Ames試驗測定了蜂膠的誘變和抗誘變作2000,51(2):17-18用結果顯示蜂膠無(wú)致突變作用能抑制多種誘變劑誘3韓連堂,王志萍,李佩賢,等蜂膠對環(huán)磷酰胺等四種誘發(fā)的不同類(lèi)型的基因突變且無(wú)論是否經(jīng)肝微粒體酶活劑誘發(fā)突變的抑制作用[J.中國公共衛生,2001,17(5)406-407化,對陽(yáng)性物誘發(fā)的突變均有拮抗作用,所以可初步認4]周宗燦,傅娟齡,王瑩,等.57種中草藥甲醇提取物體為蜂峰膠具有廣譜的抗誘變作用。外抗突變作用的篩選[J.衛生毒理學(xué)雜志,1989,3(4)由于蜂膠抗突變作用的化學(xué)成分非常復雜,如酚212-214類(lèi)、香豆素、黃酮類(lèi)、萜類(lèi)、維生素AE、植物固醇及微量5]蔡蕾.食物中非營(yíng)養成分的生物學(xué)效應研究進(jìn)展[J.國元素等蜂膠抑制基因突變的作用機制也應是一個(gè)多方外醫學(xué)衛生學(xué)分冊,1995,2(5):277-281面作用的綜合過(guò)程。如蜂膠具有很好的抗氧化作用可6徐厚銓.環(huán)境致突變物和致癌物的抑制劑及其應用們.國以清除氧自由基。其含有的鋅可以摻入DNA聚合酶的外醫學(xué)腫瘤學(xué)分冊,1989,16(1):26-29合成,促進(jìn)DNA損傷的無(wú)誤修復,蜂膠中含有的香豆7劉向前細胞程序死亡和生物黃酮素J中草藥,202素、黃酮及酚類(lèi)可以提高酶系統的活性,促進(jìn)致癌劑滅活,特別是生物黃酮素,可能通過(guò)阻止異源物質(zhì)的酶8]周土新.超氧化物歧化酶及其金屬輔基與惡性腫瘤的關(guān)系中國煤化工224):228-231CNMHGCARCINOUVESYS, TERATOC\ESYS MUTALE\EsYy0044